| 中文名称: | SP葡聚糖凝胶C-25 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | |||||
| CAS No: | 61840-62-8 | ||||
| CAS No: | 61840-62-8 | ||||
包装规格：
25g in poly bottle
产品简介：
| 产品编号 | S14258 | S14259 | C14932 | C14933 |
| 产品名称 | SP葡聚糖凝胶C-25 | SP葡聚糖凝胶C-50 | CM葡聚糖凝胶C-25 | CM葡聚糖凝胶C-50 |
| 载量： | 强阳离子 | 强阳离子 | 强阳离子 | 强阳离子 |
| 颗粒大小 | 1.5-2.6mmol/g 干粉 |
1.5-2.6mmol/g 干粉 |
3.5-5 mmol/g 干粉 |
3.5-5 mmol/g 干粉 |
| 最大流速* | 100cm/h | 45cm/h | 100cm/h | 45cm/h |
| 工作pH值 | 4-12 | 4-12 | 6-10 | 6-10 |
| 稳定性 | 0.1M 的酸碱以及常规缓冲液 | |||
| * 层析柱10mm*20cm，5 cm柱床高度，流动相为水，25℃。 | ||||
操作步骤：
一：填料的准备
1：填料的准备
将干粉浸泡于纯水或缓冲液中，液体可以适当多加一些，室温下完全溶胀需2天（室温低的情况下可能时间要延长），或者用热水浸泡大约4个小时（直接倒进去即可，切记不要水浴）。完全溶胀后除去上清液以及上层少许漂浮物，用缓冲液彻底清洗填料。
二：装柱
1：所有实验材料均需平衡至色谱层析操作的温度，所有的缓冲液进行脱气处理（填料不可以超声）。
2：检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
3：用去离子水清洗掉 20%乙醇保存液，用缓冲液配成匀浆。
4：将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
5：用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
三：平衡柱子
1：用上样的平衡缓冲液平衡柱子后即可上样。（当流出液的 pH 和电导值与起始缓冲液相同时层析柱即完全平衡）。
四：上样
样品应溶解在起始平衡缓冲液中，或者通过透析或脱盐的方法进行缓冲液置换，将样品缓冲液转移至起始平衡缓冲液。样品的粘度不应超过平衡缓冲液，上样前必须使用 0.45um 微孔滤膜对样品进行过滤。
最常见的程序是让目标分子结合到离子交换柱上，其他杂质流出。然而，在一些情况下，离子交换柱结合杂质而使目标分子流出，这样的操作也是可以的。
缓冲液的离子强度应保持较低，以免干扰样品结合，推荐的操作 pH 值应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内，并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个 pH 单位。
对于目标分子的吸附，选择具有适当 pH 的缓冲液是至关重要的，请参考表1。
五：洗脱
对于 CM 葡聚糖凝胶和 SP 葡聚糖凝胶填料，一般使用盐浓度递增或 pH 值递增（线性或者阶梯梯度）的方式来进行洗脱。
六：再生
根据样品的性质，通常通过用高离子强度洗脱缓冲液，如 2M NaCl 对柱子进行洗涤，或改变缓冲液pH，然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。如果填料吸附性能发生改变，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来，则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。
七：再位清洗
1：通过用 2-3 倍柱床体积的 0.1M NaOH 溶液在位清洗填料，随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性，从而除去沉淀的蛋白质、疏水结合的蛋白质和脂蛋白。
八：保存
未使用的填料，请室温密闭保存。使用完的填料，用纯水彻底冲洗，用然后保存在20%乙醇中，4℃保存，不能冷冻。
1：填料的准备
将干粉浸泡于纯水或缓冲液中，液体可以适当多加一些，室温下完全溶胀需2天（室温低的情况下可能时间要延长），或者用热水浸泡大约4个小时（直接倒进去即可，切记不要水浴）。完全溶胀后除去上清液以及上层少许漂浮物，用缓冲液彻底清洗填料。
二：装柱
1：所有实验材料均需平衡至色谱层析操作的温度，所有的缓冲液进行脱气处理（填料不可以超声）。
2：检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
3：用去离子水清洗掉 20%乙醇保存液，用缓冲液配成匀浆。
4：将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
5：用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
三：平衡柱子
1：用上样的平衡缓冲液平衡柱子后即可上样。（当流出液的 pH 和电导值与起始缓冲液相同时层析柱即完全平衡）。
四：上样
样品应溶解在起始平衡缓冲液中，或者通过透析或脱盐的方法进行缓冲液置换，将样品缓冲液转移至起始平衡缓冲液。样品的粘度不应超过平衡缓冲液，上样前必须使用 0.45um 微孔滤膜对样品进行过滤。
最常见的程序是让目标分子结合到离子交换柱上，其他杂质流出。然而，在一些情况下，离子交换柱结合杂质而使目标分子流出，这样的操作也是可以的。
缓冲液的离子强度应保持较低，以免干扰样品结合，推荐的操作 pH 值应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内，并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个 pH 单位。
对于目标分子的吸附，选择具有适当 pH 的缓冲液是至关重要的，请参考表1。
五：洗脱
对于 CM 葡聚糖凝胶和 SP 葡聚糖凝胶填料，一般使用盐浓度递增或 pH 值递增（线性或者阶梯梯度）的方式来进行洗脱。
六：再生
根据样品的性质，通常通过用高离子强度洗脱缓冲液，如 2M NaCl 对柱子进行洗涤，或改变缓冲液pH，然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。如果填料吸附性能发生改变，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来，则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。
七：再位清洗
1：通过用 2-3 倍柱床体积的 0.1M NaOH 溶液在位清洗填料，随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性，从而除去沉淀的蛋白质、疏水结合的蛋白质和脂蛋白。
八：保存
未使用的填料，请室温密闭保存。使用完的填料，用纯水彻底冲洗，用然后保存在20%乙醇中，4℃保存，不能冷冻。
| 表1：Buffers for cation exchange chromatography | ||||
| pH interva | Substance | Conc.(mM) | Counter-ion | pKa(25℃) |
| 1.4-2.4 | Maleic acid | 20 | Na+ | 1.92 |
| 2.6-3.6 | Methyl malonic acid | 20 | Na+or Li+ | 3.07 |
| 2.6-3.6 | Citric acid | 20 | Na+ | 3.13 |
| 3.3-4.3 | Lactic acid | 50 | Na+ | 3.86 |
| 3.3-4.3 | Formic acid | 50 | Na+or Li+ | 3.75 |
| 3.7-4.7 | Succinic acid | 50 | Na+ | 4.21 |
| 5.1-6.1 | Succinic acid | 50 | Na+ | 5.64 |
| 4.3-5.3 | Acetic acid | 50 | Na+or Li+ | 4.75 |
| 5.2-6.2 | Methyl malonic acid | 50 | Na+or Li+ | 5.76 |
| 5.6-6.6 | MES | 50 | Na+or Li+ | 6.27 |
| 6.7-7.7 | Phosphate | 50 | Na+ | 7.20 |
| 7.0-8.0 | HEPES | 50 | Na+or Li+ | 7.56 |
| 7.8-8.8 | Bicine | 50 | Na+ | 8.33 |
保存条件：
室温
注意事项：
1：上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45um 的过滤器过滤。
2：在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
3：不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
2：在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
3：不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
UN码：
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危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
