产品简介：
本试剂盒利用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-Free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
操作步骤：
实验参考
一：细胞培养
1：贴壁细胞：不需消化，彻底吸干净培养液体后直接加推荐量裂解液 RLT (见附录一) 反复吹打细胞裂解 (裂解后直接接操作步骤项三) ；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰蛋白酶消化后吹打下来收集细胞到 1.5ml 离心管。
2：悬浮细胞：收集<107 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管。
3：13000rpm离心10秒 (或者300g离心5分钟) ，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液 导致产量纯度降低。
4：立刻接操作步骤项下三
二：2. 动物组织(例如鼠肝脑)
1：匀浆器匀浆:新鲜组织加入 350μl(<20mg 组织)或者 600μl(20-30mg 组织)的裂解液 RLT 后玻璃匀浆器或电动匀浆器将组 织彻底研磨匀浆。
2：液氮研磨+匀浆:在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(20mg/30mg)转入装有 350μl/600μl 组织裂解液RLT的 1.5ml 离心管中, 剧烈振荡20秒，难裂解样品可用移液器反复吹打匀浆。
注意:若研磨匀浆后不溶物碎片太多，将匀浆后裂解物 13000rpm 离心3分钟去除碎片或者不溶物。将上清液转移到新的1.5ml离心管内。
3：立刻接操作步骤项下三
三：较精确估计裂解物 (上清) 体积，加入等体积的70%乙醇 (请先检查是否已加入无水乙醇) ，此时可能出现沉淀，但是不影响提取 过程，立即吹打混匀，不要离心。
四：将混合物(每次小于720μl ，多可以分两次加入) 加入一个吸附柱 RA 中，吸附柱放入收集管中，13000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
五：加入 700μl 去蛋白液 RW1 ，室温放置 30 秒，13000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
六：加入500μl漂洗液 RW (请先检查是否已加入无水乙醇) ，13000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液 RW，重复一遍。
七：将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm 离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
八：取出吸附柱 RA ，放入一个干净 1.5ml 离心管中 (自备，离心时稍微错开斜放盖子，以便能带着盖子离心) ，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase-Free H2O ，室温放置1分钟。1,3,000 rpm 离心1分钟得到 RNA 溶液。洗脱缓冲液体积不应少于30 μl (体积过小影响回收效率) 。将离心得到的RNA溶液加回到吸附柱重复洗脱一遍可以提高 RNA 浓度。
附录：
贴壁培养细胞数量表 (注：一般情况下，3.5cm直径培养皿或者更小培养容器加350μl裂解液 RLT ，6cm直径培养皿或者更大培养容器加600μl裂解液RLT 。最大处理量不超过107个细胞。)
一：细胞培养
1：贴壁细胞：不需消化，彻底吸干净培养液体后直接加推荐量裂解液 RLT (见附录一) 反复吹打细胞裂解 (裂解后直接接操作步骤项三) ；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰蛋白酶消化后吹打下来收集细胞到 1.5ml 离心管。
2：悬浮细胞：收集<107 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管。
3：13000rpm离心10秒 (或者300g离心5分钟) ，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液 导致产量纯度降低。
4：立刻接操作步骤项下三
二：2. 动物组织(例如鼠肝脑)
1：匀浆器匀浆:新鲜组织加入 350μl(<20mg 组织)或者 600μl(20-30mg 组织)的裂解液 RLT 后玻璃匀浆器或电动匀浆器将组 织彻底研磨匀浆。
2：液氮研磨+匀浆:在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(20mg/30mg)转入装有 350μl/600μl 组织裂解液RLT的 1.5ml 离心管中, 剧烈振荡20秒，难裂解样品可用移液器反复吹打匀浆。
3：立刻接操作步骤项下三
三：较精确估计裂解物 (上清) 体积，加入等体积的70%乙醇 (请先检查是否已加入无水乙醇) ，此时可能出现沉淀，但是不影响提取 过程，立即吹打混匀，不要离心。
四：将混合物(每次小于720μl ，多可以分两次加入) 加入一个吸附柱 RA 中，吸附柱放入收集管中，13000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
五：加入 700μl 去蛋白液 RW1 ，室温放置 30 秒，13000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
六：加入500μl漂洗液 RW (请先检查是否已加入无水乙醇) ，13000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液 RW，重复一遍。
七：将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm 离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
八：取出吸附柱 RA ，放入一个干净 1.5ml 离心管中 (自备，离心时稍微错开斜放盖子，以便能带着盖子离心) ，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase-Free H2O ，室温放置1分钟。1,3,000 rpm 离心1分钟得到 RNA 溶液。洗脱缓冲液体积不应少于30 μl (体积过小影响回收效率) 。将离心得到的RNA溶液加回到吸附柱重复洗脱一遍可以提高 RNA 浓度。
附录：
贴壁培养细胞数量表 (注：一般情况下，3.5cm直径培养皿或者更小培养容器加350μl裂解液 RLT ，6cm直径培养皿或者更大培养容器加600μl裂解液RLT 。最大处理量不超过107个细胞。)
| 培养器皿 | 底面积(cm2 ) | 加培养液量(mL) | 可获细胞量 |
| 24孔培养板 | 2 | 1.0 | 5×105 |
| 6孔培养板 | 9.6 | 2.5 | 2.5×106 |
| 3.5cm培养皿 | 8 | 3.0 | 2.0×106 |
| 6cm培养皿 | 21 | 5.0 | 5.2×106 |
| 25cm塑料培养瓶 | 25 | 5.0 | 5.2×106 |
| 100mL玻璃培养瓶 | 33 | 10.0 | 7×106 |
产品特点：
1：离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
2：不需要苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀，快速方便，一般可在30分钟内完成。
3：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达2. 1 - 2.2 ，基本无DNA残留，可用于RT-PCR ，Northern-blot 和各种实验。
2：不需要苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀，快速方便，一般可在30分钟内完成。
3：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达2. 1 - 2.2 ，基本无DNA残留，可用于RT-PCR ，Northern-blot 和各种实验。
组分：
| 50T | 注意事项 | |
| 裂解液 RLT | 30mL | 室温密闭干燥保存 |
| 去蛋白液 RW1 | 40mL | 室温密闭干燥保存 |
| 漂洗液 RW | 10mL | 初次使用前加入42mL无水乙醇 |
| 70%乙醇 | 9mL | 提供 9mL RNase-Free H2O ，初次使用前加入21mL无水乙醇 |
| RNase-Free H2O | 10mL | 室温密闭干燥保存 |
| RNase-Free 吸附套管 | 50套 | 室温密闭干燥保存 |
保存条件：
室温
注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm 的传统台式离心机，如 Eppendorf 5415C或者类似离心机。
2. 需要自备乙醇 (尽量新开封或者RNA专用) ，一次性注射器，研钵。
3. 裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150°C 烘烤4 小时，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度 0. 1%( v/v) ，37°C 放置过夜，高压灭菌。)
5.关于DNA 的微量残留：
一般来说任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,如果要进行严格的 mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物, 以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-Free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用 DNase I处理后的 RNA 清洁。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。
2. 需要自备乙醇 (尽量新开封或者RNA专用) ，一次性注射器，研钵。
3. 裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150°C 烘烤4 小时，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度 0. 1%( v/v) ，37°C 放置过夜，高压灭菌。)
5.关于DNA 的微量残留：
一般来说任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,如果要进行严格的 mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物, 以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-Free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用 DNase I处理后的 RNA 清洁。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。
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危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
