产品简介：
本产品采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分如内毒素去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。提取的质粒纯度很高，并去除了大部分内毒素，除用于常规的PCR，酶切，转化等实验外，还可以直接用于原生质体转染等一般的转染实验。特别要求高的细胞系转染可选择艾德莱的PL13-无内毒素质粒大量提取试剂盒。
操作步骤：
第一次使用前请先在漂洗液WB瓶和去蛋白液PE瓶中按标签指示加入无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入。
将RNaseA全部加入溶液P1中，混匀。每次使用后置于2-8°C保存。
1：取150-200ml(最多不超过300ml)过夜培养的菌液加入50ml离心管，8,000×g(约9,000rpm)，离心1min，尽可能的倒干上清，收集菌体。
如使用50ml离心管，可以离心弃上清后，在同一个50ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
2：加7.5ml溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3：加7.5ml的溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温放置4-5min。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应超过5min!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
4：加7.5ml溶液N3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。8,000×g离心10min，小心吸取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。
加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。
如有漂浮白色沉淀，可用吸头撇开浮沫伸入液面下吸取，偶然吸到少量漂浮的白色沉淀也不影响实验结果，后续过滤漂洗过程中都会去除。
5：向上一步得到的上清中加入0.5倍体积异丙醇(约10ml)后充分颠倒混匀后，分多次转移混合液至吸附柱DC中，8,000×g离心1min，弃滤液。
个别情况下离心机转子倾角较大，建议每次加入吸附柱的溶液体积为10ml(不超过，以防产生漏液现象)。直到所有混合溶液通过此吸附柱。
6：加入10ml去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!)，8,000×g离心1min，弃滤液。
7：加入10ml漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，8,000×g离心1min，弃滤液。再加入10ml漂洗液WB，重复漂洗一次，弃滤液。
8：将空吸附柱放回收集管中，8,000×g离心3min以干燥基质膜上残留乙醇。
该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并降低洗脱效率，降低质粒产量。
9：将吸附柱置于新的50ml离心管中，室温晾干2-3min，在吸附膜的中间部位加1ml-2ml洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-75°C水浴中预热可提高产量)，室温放置2min，8,000×g离心1min，弃吸附柱。
推荐:为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1min，8,000×g离心1min。洗脱两遍可提高浓度约10%。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量(最小不应少于1ml)。
将RNaseA全部加入溶液P1中，混匀。每次使用后置于2-8°C保存。
1：取150-200ml(最多不超过300ml)过夜培养的菌液加入50ml离心管，8,000×g(约9,000rpm)，离心1min，尽可能的倒干上清，收集菌体。
如使用50ml离心管，可以离心弃上清后，在同一个50ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
2：加7.5ml溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3：加7.5ml的溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温放置4-5min。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应超过5min!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
4：加7.5ml溶液N3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。8,000×g离心10min，小心吸取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。
加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。
如有漂浮白色沉淀，可用吸头撇开浮沫伸入液面下吸取，偶然吸到少量漂浮的白色沉淀也不影响实验结果，后续过滤漂洗过程中都会去除。
5：向上一步得到的上清中加入0.5倍体积异丙醇(约10ml)后充分颠倒混匀后，分多次转移混合液至吸附柱DC中，8,000×g离心1min，弃滤液。
个别情况下离心机转子倾角较大，建议每次加入吸附柱的溶液体积为10ml(不超过，以防产生漏液现象)。直到所有混合溶液通过此吸附柱。
6：加入10ml去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!)，8,000×g离心1min，弃滤液。
7：加入10ml漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，8,000×g离心1min，弃滤液。再加入10ml漂洗液WB，重复漂洗一次，弃滤液。
8：将空吸附柱放回收集管中，8,000×g离心3min以干燥基质膜上残留乙醇。
该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并降低洗脱效率，降低质粒产量。
9：将吸附柱置于新的50ml离心管中，室温晾干2-3min，在吸附膜的中间部位加1ml-2ml洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-75°C水浴中预热可提高产量)，室温放置2min，8,000×g离心1min，弃吸附柱。
推荐:为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1min，8,000×g离心1min。洗脱两遍可提高浓度约10%。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量(最小不应少于1ml)。
产品特点：
1：离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2：独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3：不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速，方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.5-2mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90%。
4：获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、原生质体转染等各种分子生物学实验。
2：独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3：不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速，方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.5-2mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90%。
4：获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、原生质体转染等各种分子生物学实验。
组分：
| 组分 | 规格10T | 储存 |
| RNaseA(10mg/ml) | 750μl | 4℃ |
| 溶液P1 | 77mL | 4℃ |
| 溶液P2 | 77mL | RT |
| 溶液N3 | 77mL | RT |
| 去蛋白液PE(第一次使用前按说明加指定量乙醇) | 64mL | RT |
| 漂洗液WB(第一次使用前按说明加指定量乙醇) | 50mL | RT |
| 洗脱缓冲液EB | 20mL | RT |
| 吸附柱DC | 10EA | RT |
| 收集管(50mL) | 10EA | RT |
保存条件：
室温运输，按说明书保存。
注意事项：
一：储存注意事项
1：RNaseA保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输，收到后，不超过25°C室温至少保存6个月，4°C保存12个月，长期保存放-20°C。
2：第一次使用时，可将试剂盒所带全部的RNaseA加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于4°C可保存3个月左右。如果溶液P1中RNaseA时间较久失活了，提取的质粒可能有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNaseA即可。
3：环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出，出现浑浊或者沉淀，可在37°C水浴加热几分钟即可恢复澄清，重新混匀，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
二：其他注意事项
1：所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到8,000×g(约9,000rpm)，带50ml转头的台式离心机。
2：提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10Kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，洗脱缓冲液应在70°C预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
3：得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/mlDNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4：质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
1：RNaseA保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输，收到后，不超过25°C室温至少保存6个月，4°C保存12个月，长期保存放-20°C。
2：第一次使用时，可将试剂盒所带全部的RNaseA加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于4°C可保存3个月左右。如果溶液P1中RNaseA时间较久失活了，提取的质粒可能有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNaseA即可。
3：环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出，出现浑浊或者沉淀，可在37°C水浴加热几分钟即可恢复澄清，重新混匀，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
二：其他注意事项
1：所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到8,000×g(约9,000rpm)，带50ml转头的台式离心机。
2：提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10Kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，洗脱缓冲液应在70°C预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
3：得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/mlDNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4：质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
