M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称:
别名:	M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒
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PS1546 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 (psaitong)

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产品简介：

M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。

操作步骤：

以 800μl噬菌体感染细菌培养上清提取举例:
第一次使用前请先在漂洗液WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1：将M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在1.5 毫升离心管，12,000rpm 离心5 分钟沉淀菌体。
2：小心取800μl 上清转入新的1.5ml 离心管，加入400μl 结合液MB，充分混匀。如果使用的上清大于或者小于800μl，则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。
3：将上述混合物加入一个吸附柱AC 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心15秒，倒掉收集管中的废液。
吸附柱一次最多只可以容纳大约700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱
内，重复步骤3。
4：加入700μl 漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
5：将吸附柱AC 放回空收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6：取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加60μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在50℃水浴中预热），室温放置1 分钟，12,000rpm 离心1 分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，10,000rpm 离心1 分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于40μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
7：DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

附录（M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程）:
下面举例说明 M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程，详细的 M13噬菌体（或 M13来源噬粒）培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。
1：37℃ 振摇过夜培养合适的噬菌体宿主菌（如JM109）。
2：使用6％的过夜培养菌接种新鲜的LB 培养液，37℃振摇培养一个小时。
3：根据M13 噬菌体的储存液的浓度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃振摇培养5-6 个小时。
4：将上面M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在1.5 毫升离心管，12,000rpm 离心5 分钟沉淀菌体。
5：可选步骤: 小心取1 毫升上清转入新的1.5ml 离心管，重复步骤4 离心5 分钟。这步有助于去除上清中残留的微量宿主菌 RNA或者 DNA。
6：小心取800μl 上清转入新的1.5ml 离心管。
7：按照操作步骤提取噬菌体单链DNA。

问题与解决办法：

低核酸产量或者纯度不高	试剂盒储存在非最佳条件-建议：收到试剂盒后总是存放在室温（15℃-20℃）
	缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下-建议：储存在室温（15℃-20℃），每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发， pH 改变和污染。
	漂洗液WB 中忘记加无水乙醇-建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
	试剂和样品没有充分混匀-建议：加入每个试剂后都要充分混匀。
	噬菌体上清滴度太低-建议：离心取噬菌体感染细菌培养物上清时离心最好不要超过5 分钟，转速不要超过12,000rpm，否则噬菌体上清也可能离心下来。重新培养一次噬菌体感染细菌。
	洗脱效率不高-建议：确保做了步骤5，否则残留乙醇会影响洗脱效率，仔细阅读步骤6 和只使用洗脱缓冲液EB 洗脱。
DNA 下游酶切不能切开或者酶切不完全	忘记做步骤5，乙醇抑制了酶切反应-建议：做步骤5，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。
DNA 下游酶切不能切开或者酶切不完全	一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应-建议：将洗脱的基因组DNA 溶液13,000rpm 再离心一分钟，小心取上清使用。
纯化的DNA 产物D260 数值异常偏高	一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了分光光度计读数-建议：将洗脱的回收DNA 溶液13,000rpm 再离心一分钟，小心取上清使用。

产品特点：

1：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2：节省时间，简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。
3：产量高，典型的产量800µl M13丝状噬菌体上清可以提取3µg噬菌体单链DNA。
4：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7-1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达650bp。

保存条件：

室温

注意事项：

一：储存注意事项
1：结合液MB 低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2：避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
二：其他注意事项
1：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2：开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。
3：结合液MB 含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

搜索质检报告(COA)

参考文献 & 客户发表文献