高纯度质粒小量快速提取试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	高纯度质粒小量快速提取试剂盒
英文名称:	质粒小提；小量菌液
别名:	高纯度质粒小量快速提取试剂盒质粒小提；小量菌液
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PS1545 高纯度质粒小量快速提取试剂盒离心柱型 (psaitong)

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产品简介：

本产品采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

操作步骤：

第一次使用前请先在漂洗液WB 瓶和去蛋白液PE 瓶中按标签指示加入无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入。
将RNase A 全部加入溶液P1 中，混匀。每次使用后置于2-8°C 保存。
1：柱平衡：向吸附柱AC 中加入100 μl 平衡液，12,000 rpm 离心1 min，弃滤液，备用。
平衡液可以增强硅胶膜的吸附核酸能力，请使用当天处理的吸附柱。
2：取1.5-5 ml 过夜培养的菌液加入1.5 ml 离心管，12,000 rpm 离心30 sec，尽可能的倒干上清，收集菌体。
如使用收集超过1.5 ml 菌液，可以离心弃上清后，在同一个1.5 ml 管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
3：加250 μl 溶液P1 重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4：加250 μl 的溶液P2，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解，室温放置4-5min。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA 剪切断裂！所用时间不应超过5min！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5：加350 μl 溶液P3，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm 离心10 min，小心吸取上清加入吸附柱AC 中（吸附柱放入收集管中），避免吸取到漂浮的白色沉淀。
加入溶液P3 后应该立即混匀，以免产生SDS 的局部沉淀。
6：12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。
7：加入500 μl 去蛋白液PE（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。
8：加入600 μl 漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。再加入600 μl 漂洗液WB 重复漂洗一次，弃滤液。
9：将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm 离心2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10：取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50 μl-100μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在80°C-90°C 水浴中预热可提高产量），室温放置2 min，12,000 rpm 离心1 min，弃吸附柱。
推荐：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1 min，12,000 rpm 离心1 min。洗脱两遍可提高浓度约10%。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量（最小不应少于30 μl）。

产品特点：

1：离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2：独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM 系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3：快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

组分：

组分	规格50T	规格100T	储存
平衡液	5mL	10mL	RT
RNase A	150 μl	250 μl	4℃
溶液P1	15mL	25mL	4℃
溶液P2	15mL	25mL	RT
溶液P3	20mL	35mL	RT
去蛋白液PE（第一次使用前按标签说明加指定量乙醇）	16mL	32mL	RT
漂洗液WB（第一次使用前按标签说明加指定量乙醇）	13mL	25mL	RT
洗脱缓冲液EB	15mL	15mL	RT
吸附柱AC	50EA	100EA	RT
收集管（2ml）	50EA	100EA	RT

保存条件：

室温运输，按说明书保存。

注意事项：

一：储存注意事项
1：RNase A 保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输，收到后，不超过25°C 室温至少保存6 个月，4°C 保存12 个月，长期保存放-20°C。
2：第一次使用时，可将试剂盒所带全部的RNase A 加入溶液P1 后置于4°C可保存3 个月左右。如果溶液P1 中RNase A 时间较久失活了，提取的质粒可能有微量RNA 残留，在溶液P1 中补加RNase A 即可。
3：环境温度低时溶液P2 中SDS 可能会析出，出现浑浊或者沉淀，可在37°C水浴加热几分钟即可恢复澄清，重新混匀，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
二：其他注意事项
1：所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到12,000rpm 的台式离心机。
2：提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14-16个小时，可提取出多达20-30 μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。
3：得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50 μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4：质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
5：洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20°C。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10 mM Tris-HCl， 1 mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

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