产品简介:
本产品由跨度从10-180kDa的10种纯化的天然蛋白混合而成,各条带浓度约为0.2-0.4mg/ml。其中75kDa条带为红色预染条带,25kDa条带为绿色预染条带,方便判断各个条带的准确位置。本产品适合作为SDS-PAGE电泳时,变性蛋白样品的分子量参照,并可实时观察蛋白样品的电泳分离状况,也可用于检测Westernblot的转膜效率。由于共价结合的染料会影响蛋白质分子的电泳迁移率,本产品适于粗略地估计目的蛋白样品的分子量。
操作步骤:
1:将本产品于室温融化后,轻柔混匀,使沉淀充分溶解(切勿煮沸加热)。
2:吸取 3-5 μl 到 SDS-聚丙烯酰胺胶的上样孔中,与待测样品一起电泳和转膜
3:转膜后,进行正常的封闭、一抗和二抗孵育,最后进行 ECL 发光检测。
4:电泳结束后,通过蛋白染色液染色观察目的条带。
附录:转膜和洗膜:
1:转膜条件(冰上进行)
a. Transfer with buffer containing 20% methanol to fix proteins on membrane。
b. Wash membrane with PBS or TBS containing less than 0.1% Tween-20 at 4°C。
2:洗膜条件(4 度进行)
Membrane: Nitrocellulose membranes / PVDF。
Wash Buffer:1X Tris buffered saline, 0.1% Tween-20 (TBST)(吐温 20 不能超过 0.1%)。
3:Stripping Buffer
Stripping Buffer: 15g Glycine, 1g SDS, 10 ml Tween20, pH2.2–Adjust volume to 1L。
如果需要用到含有 DTT /b-ME 的 Stripping buffer,膜需要先以 1X Tris buffered saline(TBS) 行 Stripping。洗三次,把 Tween-20 去干净后,再进行Stripping。
1X Tris buffered saline: 6.05 g Tris and 8.76 g NaCl in 800 mL of H2O.
Adjust pH to 7.5 with 1 M HCl and make volume up to 1 L with H2O
2:吸取 3-5 μl 到 SDS-聚丙烯酰胺胶的上样孔中,与待测样品一起电泳和转膜
3:转膜后,进行正常的封闭、一抗和二抗孵育,最后进行 ECL 发光检测。
4:电泳结束后,通过蛋白染色液染色观察目的条带。
附录:转膜和洗膜:
1:转膜条件(冰上进行)
a. Transfer with buffer containing 20% methanol to fix proteins on membrane。
b. Wash membrane with PBS or TBS containing less than 0.1% Tween-20 at 4°C。
2:洗膜条件(4 度进行)
Membrane: Nitrocellulose membranes / PVDF。
Wash Buffer:1X Tris buffered saline, 0.1% Tween-20 (TBST)(吐温 20 不能超过 0.1%)。
3:Stripping Buffer
Stripping Buffer: 15g Glycine, 1g SDS, 10 ml Tween20, pH2.2–Adjust volume to 1L。
如果需要用到含有 DTT /b-ME 的 Stripping buffer,膜需要先以 1X Tris buffered saline(TBS) 行 Stripping。洗三次,把 Tween-20 去干净后,再进行Stripping。
1X Tris buffered saline: 6.05 g Tris and 8.76 g NaCl in 800 mL of H2O.
Adjust pH to 7.5 with 1 M HCl and make volume up to 1 L with H2O
保存条件:
-20 ̊C 恒温长期保存,4 ̊C 保存 6 个月,建议分装保存,避免反复冻融。
注意事项:
1:使用时应该将从冰箱中取出的产品恢复至室温后使用,否则可能由于低温下蛋白变性不彻底导致电泳条带出现不同程度的弥散
2:使用前先将产品恢复至室温后混匀,使沉淀充分溶解,否则可能导致电泳条带出现不同程度的弥散或拖带。
3:本产品含有 SDS,蛋白已变性,不宜作为天然蛋白分子电泳时的分子量参照标准。
2:使用前先将产品恢复至室温后混匀,使沉淀充分溶解,否则可能导致电泳条带出现不同程度的弥散或拖带。
3:本产品含有 SDS,蛋白已变性,不宜作为天然蛋白分子电泳时的分子量参照标准。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )