产品简介：
本制品采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，大幅度提高了热稳定性和反转录效率。5 ×TRUE RT MasterMix 为一管式反转录预混 Mix，含有反转录所需的所有试剂(TRUEscript Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer)，只需 加入模板 RNA 和水即可进行反应。使得 cDNA 的合成更加的方便快捷，特别适合 cDNA 合成以 后的两步法 Real Time PCR 检测。通常 Real Time RT-PCR 等实验需要先用 DNase I 消化去除 RNA 中残留的基因组 DNA(gDNA) ，但是传统 DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损 失。本试剂盒中使用了具有 DNA 分解活性的特殊 gDNA Remover，只需一步操作，即可同时完 成基因组清除与逆转录反应，极大简化了操作步骤，避免了复杂加样过程造成的样品污染与 RNA 降解的风险。
本产品适用于第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。
本产品适用于第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。
操作步骤：
一：第一链cDNA合成(以20μl反应体系为例，也可以采用10μl反应体系)
1：将模板RNA、gDNARemover、5×TRUERTMasterMix在冰上解冻;RNasefreeH2O在室温(15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2：在RNAsefree管里面加入表1成分:(建议使用PCR管冰上配制，置PCR仪反应)
3：移液器轻轻吹打混匀(总体积20μl)。如使用mRNA模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有Poly(A)尾结构，42°C孵育15min。如使用mRNA模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25°C孵育10min，42°C孵育15min。
注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C-55°C(先在42°C孵育2分钟以清除基因组DNA)，有助于提高产量。
4：85°C加热5sec失活TRUEscriptHˉRTase和gDNARemover。
5：得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
二：RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物(一般不超过qPCR反应体积的1/10)作为qPCR模板，按照厂家荧光定量PCR试剂说明书进行下一步荧光定量PCR。如果表达基因含量丰富，可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
1：将模板RNA、gDNARemover、5×TRUERTMasterMix在冰上解冻;RNasefreeH2O在室温(15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2：在RNAsefree管里面加入表1成分:(建议使用PCR管冰上配制，置PCR仪反应)
3：移液器轻轻吹打混匀(总体积20μl)。如使用mRNA模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有Poly(A)尾结构，42°C孵育15min。如使用mRNA模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25°C孵育10min，42°C孵育15min。
注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C-55°C(先在42°C孵育2分钟以清除基因组DNA)，有助于提高产量。
4：85°C加热5sec失活TRUEscriptHˉRTase和gDNARemover。
5：得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
二：RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物(一般不超过qPCR反应体积的1/10)作为qPCR模板，按照厂家荧光定量PCR试剂说明书进行下一步荧光定量PCR。如果表达基因含量丰富，可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
| 表1 | |
| Components | Volume |
| Total RNA/mRNA | ≤ 15 μl * |
| 5 ×TRUE RT MasterMix | 4 μl(见注意事项 3) |
| gDNA Remover | 1 μl(见注意事项 3) |
| RNase free H2O | to 20 μl(补足到总体积 20 μl) |
| *Total RNA 不超过 2 μg，mRNA 不超过 200 ng (20 μl 体系) | |
产品特点：
1：新一代反转录酶大幅度提高了热稳定性和反转录效率。
2：全预混的反转录Mix，只需一步同时加入gDNA Remover、模板RNA 和水，实现cDNA 合成和去除基因组DNA同时进行。15分钟简单快速完成反转录。
3：RNA模板的体积最多可加到总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
4：预混合Mix在-20°C不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
5：本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
2：全预混的反转录Mix，只需一步同时加入gDNA Remover、模板RNA 和水，实现cDNA 合成和去除基因组DNA同时进行。15分钟简单快速完成反转录。
3：RNA模板的体积最多可加到总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
4：预混合Mix在-20°C不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
5：本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
组分：
| 组分 | 规格100T |
| 5 ×TRUE RT MasterMix | 400μl |
| gDNA Remover | 100μl |
| RNase free H2O | 2×1mL |
保存条件：
-20℃，12个月。
注意事项：
1：避免RNase污染。
2：为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3：5×TRUERTMasterMix和gDNARemover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5×TRUERTMasterMix和gDNARemover内包含的酶均为过量，即使每次5×TRUERTMasterMix按照3.6μl-3.8μl使用，gDNARemover按照0.8μl-0.9μl也不影响使用效果。
2：为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3：5×TRUERTMasterMix和gDNARemover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5×TRUERTMasterMix和gDNARemover内包含的酶均为过量，即使每次5×TRUERTMasterMix按照3.6μl-3.8μl使用，gDNARemover按照0.8μl-0.9μl也不影响使用效果。
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安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
