产品简介:
本产品包含F8 FastLong 聚合酶、dNTPs 和优化的反应缓冲液,浓度为2×。使用时只需加入模板、引物,并补足水至Mix 终浓度为1×即可。本制品含红色示踪染料,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。
操作步骤:
建议PCR 体系设置: | |||
Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
2× F8 PCR MasterMix | 2.5 μl | 25.0 μl | 1× |
Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
as required | up to 25 μl | up to 50 μl | |
参考模板用量(50 μl 反应体系): 质粒:0.1-10ng;细菌基因组:10-100ng;人类基因组:50-150ng;cDNA:1-5μl from RT reaction。 |
建议PCR 循环条件: | |||
Step | Temprature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 2-3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds | 25-35 cycles |
Annealing | 55℃ | 10-15 seconds | |
Extension | 72℃ | 10 seconds / kb | |
Final Extension | 72℃ | 1-5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
产品特点:
1:超快的扩增速度:延伸速度可以达到5-10 秒/kb,最短半小时完成PCR。
2:突出的长片段扩增能力:可以扩增高达10 kb 的长片段(包括人类基因组此类的复杂模板)。
3:良好保真性:保真度是taq 的3 倍以上。
4:强大扩增能力:产量高,对于一些有特殊结构的复杂模板和GC 含量高模板有良好效果。
2:突出的长片段扩增能力:可以扩增高达10 kb 的长片段(包括人类基因组此类的复杂模板)。
3:良好保真性:保真度是taq 的3 倍以上。
4:强大扩增能力:产量高,对于一些有特殊结构的复杂模板和GC 含量高模板有良好效果。
保存条件:
-20℃ 两年
注意事项:
1:F8 扩增速度极快,短片段或者简单模板如质粒模板可以尝试5 秒/kb 延伸速度并采用较少循环数以进一步缩短PCR 时间。长片段(≥3kb)或者复杂模板产量较低可以采用15-20秒/kb 延伸速度或者采用较多循环数。
2:F8 产量较低时可尝试采用较长的延伸时间(如20 秒/kb)和循环数(如35 个)可以提高PCR 产物的产量。
3:对于GC 含量很高的模板,短片段预变性和变性温度可以提高到98℃和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA 损伤不应该提高变性温度,应该适当延长预变性时间到5分钟,变性时间可以适当提高5-10秒。
4:如果扩增模板GC 含量高或者模板复杂扩增效果不佳时,可在反应混合物中加入DMSO 到终浓度1%-8%,按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR(Touchdown PCR)。
5:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2:F8 产量较低时可尝试采用较长的延伸时间(如20 秒/kb)和循环数(如35 个)可以提高PCR 产物的产量。
3:对于GC 含量很高的模板,短片段预变性和变性温度可以提高到98℃和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA 损伤不应该提高变性温度,应该适当延长预变性时间到5分钟,变性时间可以适当提高5-10秒。
4:如果扩增模板GC 含量高或者模板复杂扩增效果不佳时,可在反应混合物中加入DMSO 到终浓度1%-8%,按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR(Touchdown PCR)。
5:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )