产品简介:
CTAB(hexadecyItrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/LNaCl),CTAB 与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
操作步骤:
一:常规步骤
1:液氮研磨 0.1g 左右植物组织,转移到 1.5mL 离心管中,加入700uL 2×CTAB提取液(已加入还原剂)。或者液氮研磨之后,在研钵中加入 700uL 2×CTAB 提取液,然后吸取到1.5mL的离心管中(建议总体积不要超过 1mL)。
2:将离心管置于 65℃水浴 30min-1h,期间每隔 10min 左右轻轻晃动离心管。
3:水浴完成后冷却2min,加入0.5mL的氯仿-异戊醇混合液,剧烈震荡混匀。10000-12000rpm离心5-10min。
注意:上步离心后应该会分三层:上层为水相,中间为蛋白和植物碎片,下层为有机相。吸取时避免触及蛋白和有机相。如不小心吸取到中下层,或者中间层较厚,建议少吸取水相,或吸取之后再加入500uL氯仿-异戊醇混合液,重新混匀离心取上清。
4:取上步离心管中上清液到新的离心管中。
5:在上清中加入等体积的异丙醇,颠倒混匀。(或加入2倍体积的无水乙醇和1/10体积的3MpH5.2的乙酸钠)。置于-20°C沉淀30min以上,12000rpm离心l0min,弃上清。
6:沉淀用75%乙醇洗涤1次,12000rmp离心3-5 min,弃上清,沉淀自然干燥后溶于50uL去离子水或者TE缓冲液中,加入1uL RNase(20ug/mL),37℃温育30 min。
7:置于-20℃保存。
二:备选步骤
1:可以加入适量PVP去除多糖多酚污染。PVP(聚乙烯毗咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。
2:可以在加入CTAB提取液之后震荡混匀,5000rmp离心2min取上清,沉淀为未研磨充分的碎片或者不溶物。然后在上清中加入氯仿-异戊醇混合液纯化,可以有效去除未裂解的植物碎片。
3:可以在加氯仿-异戊醇混合液之前,加入Tris饱和酚(pH>7.8)-氯仿混合液震荡离心取上清后,再用氯仿-异戊醇混合液纯化,可以有效去除蛋白污染。
1:液氮研磨 0.1g 左右植物组织,转移到 1.5mL 离心管中,加入700uL 2×CTAB提取液(已加入还原剂)。或者液氮研磨之后,在研钵中加入 700uL 2×CTAB 提取液,然后吸取到1.5mL的离心管中(建议总体积不要超过 1mL)。
2:将离心管置于 65℃水浴 30min-1h,期间每隔 10min 左右轻轻晃动离心管。
3:水浴完成后冷却2min,加入0.5mL的氯仿-异戊醇混合液,剧烈震荡混匀。10000-12000rpm离心5-10min。
注意:上步离心后应该会分三层:上层为水相,中间为蛋白和植物碎片,下层为有机相。吸取时避免触及蛋白和有机相。如不小心吸取到中下层,或者中间层较厚,建议少吸取水相,或吸取之后再加入500uL氯仿-异戊醇混合液,重新混匀离心取上清。
4:取上步离心管中上清液到新的离心管中。
5:在上清中加入等体积的异丙醇,颠倒混匀。(或加入2倍体积的无水乙醇和1/10体积的3MpH5.2的乙酸钠)。置于-20°C沉淀30min以上,12000rpm离心l0min,弃上清。
6:沉淀用75%乙醇洗涤1次,12000rmp离心3-5 min,弃上清,沉淀自然干燥后溶于50uL去离子水或者TE缓冲液中,加入1uL RNase(20ug/mL),37℃温育30 min。
7:置于-20℃保存。
二:备选步骤
1:可以加入适量PVP去除多糖多酚污染。PVP(聚乙烯毗咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。
2:可以在加入CTAB提取液之后震荡混匀,5000rmp离心2min取上清,沉淀为未研磨充分的碎片或者不溶物。然后在上清中加入氯仿-异戊醇混合液纯化,可以有效去除未裂解的植物碎片。
3:可以在加氯仿-异戊醇混合液之前,加入Tris饱和酚(pH>7.8)-氯仿混合液震荡离心取上清后,再用氯仿-异戊醇混合液纯化,可以有效去除蛋白污染。
自备材料:
1:氯仿-异戊醇DNA抽提试剂24:1(PS1168)
2:还原剂巯基乙醇(M50011),65℃预热CTAB溶液后将1mL巯基乙醇加入CTAB溶液中(按照500:1体积比混合,建议按需配制,请勿多配)。
2:还原剂巯基乙醇(M50011),65℃预热CTAB溶液后将1mL巯基乙醇加入CTAB溶液中(按照500:1体积比混合,建议按需配制,请勿多配)。
保存条件:
室温,12个月。
注意事项:
1:该试剂低温放置易析出,需65℃预热震荡30min左右可正常溶解使用。
2:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
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质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )