多糖多酚植物RNA提取试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	多糖多酚植物RNA提取试剂盒
英文名称:
别名:	多糖多酚植物RNA提取试剂盒
CAS No:
CAS No:

点击下载产品说明书(PDF)

PS1386 多糖多酚植物RNA提取试剂盒 (psaitong)

相关产品

产品简介：

本产品可以有效清除gDNA 残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，离心沉淀去除多糖多酚和次级代谢产物，经裂解混合物用乙醇调节 RNA 结合吸附到基因组DNA清除柱，然后RNA被选择性洗脱滤过，吸附在基因组 DNA 清除柱上的残留 DNA 无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉 DNA。滤过的 RNA 用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H2O 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。

操作步骤：

实验前准备：取1ml裂解液 CLB至离心管内 (如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入5% β-巯基乙醇（1ml CLB加50μl β-巯基乙醇）。颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。
一：直接研磨法(实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法):
1：新鲜植物组织或者冰冻保存样品称重后取 100-200mg(水分少的样品如叶片种子等可100-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些)迅速剪成小块放入研钵，加入 1ml CLB(已加有β-巯基乙醇)室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液 CLB 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。
注意：β-巯基乙醇是裂解液 CLB 的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到 10-20%。如果特别复杂植物，可以尝试在裂解液中加入 PVP40 至终浓度 2%。
2：将裂解物转入离心管，立即剧烈振荡 15 秒，短时放回 65°C 水浴中(5-10 min)，中间偶尔颠倒 1-2 次帮助裂解。13,000rpm 离心 10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
3：取裂解物上清(在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
注意：若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。
4：立刻接操作步骤的步骤三。
二：液氮研磨法(适用广泛，提取复杂难破碎，易降解样品时推荐此法)
1：液氮中研磨新鲜或-70°C 冷冻的材料至细粉。
2：转移100-200mg 细粉(水分少的样品如叶片种子等可加 100-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些)加至预热的裂解液 CLB(已加有β-巯基乙醇)离心管中。立即剧烈涡旋 30-60 秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。
3：短时放回 65°C 水浴中(5-10 min)，中间偶尔颠倒 1-2 次帮助裂解。
4：将裂解物 13,000 rpm 离心 10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
5：取裂解物上清(在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
注意：若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。
6：立刻接操作步骤的步骤 3。
三：将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个基因组清除柱中，13,000 rpm 离心2分钟，弃掉废液。
注意：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
四：将基因组 DNA 清除柱子放在一个干净 2ml 离心管内(不用 RNAse free 或者 DEPC 处理，一般干净的新离心管即可。也可使用 RNA 吸附柱配套的新的干净收集管)，在基因组清除柱内加 500μl 裂解液 RLT Plus，13,000 rpm 离心 30 秒，收集滤液(RNA 在滤液中)，用微量移液器较精确估计滤过液体积(通常为 450-500μl 左右，滤过时候损失体积应该减去)，加入 0.5 倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
五：立刻将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm 离心2分钟，弃掉废液。
注意：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间
六：加 700μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 分钟，13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
七：加入 500μl 漂洗液 RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW，重复一遍。
八：将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
九：取出吸附柱RA，放入一个RNasefree离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μlRNase-FreeH2O(事先在 70 ̊C 水浴中加热可提高产量)，室温放置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。
十：如果预期 RNA 产量>30μg，加 30-50μl RNase-Free H2O 重复步骤 9，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要 RNA 浓度高)。
注意：洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高 15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。

产品特点：

1：离心吸附柱内硅基质膜全部采用 Whatman 特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
2：不需要苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀，快速方便，一般可在 25-30 分钟内完成。
3：应用性极广，可以提取包括复杂中草药如石斛/丹参/雪莲/人参、复杂淀粉种子如水稻/小麦/玉米种子、复杂果实如葡萄/蓝莓/草莓/西瓜果实、复杂抗逆植物如冬青/松针/沙棘/胡杨、复杂花卉月季/梅/牡丹花、复杂多糖植物紫菜/仙人掌/芦荟水稻种子等数百种样品。
4：基因组 DNA 清除柱技术可以有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。
5：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达2.0-2.2，基本无DNA残留，可用于RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。

组分：

组分名称：50T
裂解液 CLB：50mL
裂解液 RLT Plus：25mL
去蛋白液 RW1：40mL
漂洗液 RW(初次使用前请按说明加入指定量的无水乙醇)：10mL
RNase-Free H2O：10mL
基因组 DNA 清除套管：50EA
RNase-Free 吸附套管(RA)：50EA

保存条件：

室温 12个月

注意事项：

1：所有的离心步骤均在室温完成(4 ̊C 离心也可以)，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机，如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2：需要自备β-巯基乙醇、乙醇(尽量新开封或者 RNA 专用)，研钵。
3：裂解液 CLB、RLTplus 和去蛋白液 RW1 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4：样品处理量绝对不要超过基因组清除柱 DA 和和 RNA 吸附柱 RA 处理能力，否则造成 DNA 残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA 含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
5：一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留，本产品采取了独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数 RT-PCR 扩增过程中极其微量的 DNA 残留(一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的 mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR，建议在进行模板和引物的选择时:选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。将 RNA 提取物用 RNase-Free 的 DNase I 处理。在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在吸附柱 RA 上进行 DNase I 处理。

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

搜索质检报告(COA)

参考文献 & 客户发表文献