| 中文名称: | Green dsDNA for Qubit定量检测试剂盒 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | |||||
| 别名: | 用于 dsDNA 定量检测的FBGreen荧光染料 | ||||
| CAS No: | 177571-06-1 | ||||
| CAS No: | 177571-06-1 | ||||
产品简介：
在分子生物学的试验过程中，GreendsDNA定量试剂盒是荧光检测双链DNA并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的：cDNA文库的构建；用于亚克隆的DNA片段纯化及应用，比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。其中，疫苗的纯化是关键问题，我们需要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。 假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。 常规的DNA含量的检测方法是在260nm（A260）处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和 RNA，而且这种方法不灵敏（5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1）。
Qubit定量检测方法简单、方便，被多家生物制品厂所选择，成为生物制品残留DNA检测的标准。目前该方法已纳中国药典。
本方法的原理是Qubit与DNA双链结合后才发出的荧光，无DNA不发荧光；所发荧光与DNA浓度成正比。在2010年《中国药典》中提出，Qubit定量DNA的方法检出限约0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范围时线性较好(R2>0.99)。
Qubit定量检测方法简单、方便，被多家生物制品厂所选择，成为生物制品残留DNA检测的标准。目前该方法已纳中国药典。
本方法的原理是Qubit与DNA双链结合后才发出的荧光，无DNA不发荧光；所发荧光与DNA浓度成正比。在2010年《中国药典》中提出，Qubit定量DNA的方法检出限约0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范围时线性较好(R2>0.99)。
操作步骤：
一：试剂制备
Qubit dsDNA 定量试剂是以 1mL 的浓缩液形式保存在无水的 DMSO（二甲基亚砜）中。实验当天，配制 2XQubit 试剂的操作溶液，用 1xTE 按 1:200 的比例稀释浓缩液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要准备足够的操作溶液测定 20 个样品，可在 20mL1x TE 中加入 100μL Qubit dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。Qubit 试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。
溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
二：实验方法
1、标准品工作液的配制：
组分B为DNA标准品工作液
2、 染料工作液的配置：
6uL Qubit加入1mL TE(注意：用1×TE将Qubit稀释200倍，现用现配，注意避光)。
3、标准品工作液稀释：
（1）母液稀释：取10ul（1mg∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10ug∕mL，取10ul（10ug∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成100ng∕mL；
（2）倍比稀释：取800ul （100ng∕mL）的标准品工作液加入到200ul TE溶液中，浓度达到80ng∕mL（药典规定：荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好， 该法DNA检出限为0.3 ng/ml），取500ul（80ng∕mL）的标准品工作液加入到500ul TE溶液中，浓度稀释到40ng∕mL；依次倍比稀释，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液；
4、标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀，避光室温放置5min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank，测定样品和空白对照的荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
5、测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。
Qubit dsDNA 定量试剂是以 1mL 的浓缩液形式保存在无水的 DMSO（二甲基亚砜）中。实验当天，配制 2XQubit 试剂的操作溶液，用 1xTE 按 1:200 的比例稀释浓缩液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要准备足够的操作溶液测定 20 个样品，可在 20mL1x TE 中加入 100μL Qubit dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。Qubit 试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。
溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
二：实验方法
1、标准品工作液的配制：
组分B为DNA标准品工作液
2、 染料工作液的配置：
6uL Qubit加入1mL TE(注意：用1×TE将Qubit稀释200倍，现用现配，注意避光)。
3、标准品工作液稀释：
（1）母液稀释：取10ul（1mg∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10ug∕mL，取10ul（10ug∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成100ng∕mL；
（2）倍比稀释：取800ul （100ng∕mL）的标准品工作液加入到200ul TE溶液中，浓度达到80ng∕mL（药典规定：荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好， 该法DNA检出限为0.3 ng/ml），取500ul（80ng∕mL）的标准品工作液加入到500ul TE溶液中，浓度稀释到40ng∕mL；依次倍比稀释，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液；
4、标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀，避光室温放置5min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank，测定样品和空白对照的荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
5、测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。
自备材料：
微型荧光计
10×10mm 比色杯
微量检测皿适配器
Qubit dsDNA 定量检测试剂盒，1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL 体积的 200 次测定。
10×10mm 比色杯
微量检测皿适配器
Qubit dsDNA 定量检测试剂盒，1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL 体积的 200 次测定。
组分：
| 组分 | 组份名称 | 规格(200T) | 储存 |
| 组分A | Qubit dsDNA 定量试剂 | 0.1mL(200× in DMSO) | 4℃ |
| 组分B | DNA标准品工作液 | 0.2mL(10ug/mL) | 4℃ |
| 组分C | TE Buffer | 20mL | 4℃ |
保存条件：
2-8°C
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、以上信息仅做参考交流之用。
2、以上信息仅做参考交流之用。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
