| 中文名称: | 海美溴铵 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Hexadimethrine bromide | ||||
| 别名: | 1,5-二甲基-1,5-二氮杂十五甲基多溴化物;聚凝胺 | ||||
| CAS No: | 28728-55-4 | ||||
| CAS No: | 28728-55-4 | ||||
| MDL: | MFCD00133397 | ||||
产品简介：
Polybrene(聚凝胺，hexadimethrine bromide)是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的 DNA 转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的基因转染，慢病毒介导的基因转染，作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。Polybrene 也是一种有名的抗肝素剂(肝素拮抗剂)，常用来生产非特异性凝集的红细胞。另外 Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。
本产品为即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM滤膜过滤除菌。 使用时一般按 1:1000-1:2000 稀释，依细胞种类不同稀释比例不同。
本产品为即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM滤膜过滤除菌。 使用时一般按 1:1000-1:2000 稀释，依细胞种类不同稀释比例不同。
操作步骤：
一：逆转录病毒感染(Retroviral Infection)
1：重组逆转录病毒原液的制备:取5ml生长培养基(5%血清)加入约含单层转染逆转录包装细胞的 100mm 培养盘内。孵育 24h 后，吸去培养液并用 0.45μm 滤器过滤。
2：待感染细胞的培养:100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度为5×10⁵/盘。
3：病毒感染:细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2mL病毒上清(或将病毒原液稀释到2mL)感染细胞，polybrene的终浓度为5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。
4:收集病毒颗粒:加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
二：转染
1：完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%。
2：孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基-Polybrene混合液，按如下操作制备混合液:a：添加完全培
养基(60mm 培养皿 2ml，100mm 培养皿 3ml)，37°C 预热;b：添加 10ng-10μg 质粒轻轻混匀;c:加入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
3：去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每 1.5h 轻柔混匀。
4：去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSOshocksolution(15%DMSOin1XHBSS)轻轻盖住细胞(60mm 培养皿 3ml，100mm 培养皿 4ml)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘 10s，使得液体均匀分布。然后37°C 孵育细胞 4min。
5：立即去DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5mL 培养液清洗，100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
6：加入完全培养基到细胞中。
7：稳定转化:去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。瞬时表达:去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h 后收获细胞。
1：重组逆转录病毒原液的制备:取5ml生长培养基(5%血清)加入约含单层转染逆转录包装细胞的 100mm 培养盘内。孵育 24h 后，吸去培养液并用 0.45μm 滤器过滤。
2：待感染细胞的培养:100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度为5×10⁵/盘。
3：病毒感染:细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2mL病毒上清(或将病毒原液稀释到2mL)感染细胞，polybrene的终浓度为5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。
4:收集病毒颗粒:加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
二：转染
1：完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%。
2：孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基-Polybrene混合液，按如下操作制备混合液:a：添加完全培
养基(60mm 培养皿 2ml，100mm 培养皿 3ml)，37°C 预热;b：添加 10ng-10μg 质粒轻轻混匀;c:加入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
3：去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每 1.5h 轻柔混匀。
4：去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSOshocksolution(15%DMSOin1XHBSS)轻轻盖住细胞(60mm 培养皿 3ml，100mm 培养皿 4ml)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘 10s，使得液体均匀分布。然后37°C 孵育细胞 4min。
5：立即去DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5mL 培养液清洗，100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
6：加入完全培养基到细胞中。
7：稳定转化:去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。瞬时表达:去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h 后收获细胞。
保存条件：
-20°C，24个月
注意事项：
1：Polybrene对某些细胞(如末端分化的神经元，DC 细胞)毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。
2：为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套。
2：为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
