产品简介:
MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂 盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在特定溶剂 (如DMSO)存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。
操作步骤:
1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期,常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无 需消化
2、 低速离心,收集细胞沉淀。
3、 用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。
4、 细胞接种于96孔培养板,一般接种密度为3000~10000 /孔。通常细胞增殖实验每孔 加3000个细胞,细胞毒性实验每孔加入6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。
5、 37℃ 5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养6~24h。
6、 按照实验具体要求,给予0~20μl干预药物处理,37℃ 5%CO2继续培养至合适时间。
7、 弃培养液,每孔加入MTT solution和新鲜培养液,在细胞培养箱内继续孵育。
8、 弃培养液,每孔加入 DMSO,置摇床上低速振荡,使结晶物充分溶解。如果紫色结晶 较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多,溶解的时间会长一些。
9、 在酶联免疫检测仪570nm测定各孔吸光度。
2、 低速离心,收集细胞沉淀。
3、 用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。
4、 细胞接种于96孔培养板,一般接种密度为3000~10000 /孔。通常细胞增殖实验每孔 加3000个细胞,细胞毒性实验每孔加入6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。
5、 37℃ 5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养6~24h。
6、 按照实验具体要求,给予0~20μl干预药物处理,37℃ 5%CO2继续培养至合适时间。
7、 弃培养液,每孔加入MTT solution和新鲜培养液,在细胞培养箱内继续孵育。
8、 弃培养液,每孔加入 DMSO,置摇床上低速振荡,使结晶物充分溶解。如果紫色结晶 较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多,溶解的时间会长一些。
9、 在酶联免疫检测仪570nm测定各孔吸光度。
组分:
产品名称 | 规格 | Storage |
MTT solution(5mg/ml) | 10ml | -20℃ 避光 |
保存条件:
-20℃,避光,12个月
注意事项:
1、 MTT solution(5mg/ml)尽量减少反复冻融的次数,以免失效,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。
2、 由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。
3、 MTT solution在低温情况下会凝固,使用前请置于室温或20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、 观察formazan是否完全溶解,亦可以借助光学显微镜观察。
5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。
6、 应注意设立OD调零孔和对照。
7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、 由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。
3、 MTT solution在低温情况下会凝固,使用前请置于室温或20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、 观察formazan是否完全溶解,亦可以借助光学显微镜观察。
5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。
6、 应注意设立OD调零孔和对照。
7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )