包装规格:
5mL 10mL 25mL 100mL in glass bottle
产品简介:
本产品用于纯化对L-赖氨酸具有生物特异性或电荷依赖性的生物分子,已被用于纤溶酶原和纤溶酶原激活物的分离,核糖体RNA(rRNA)的分离和双链DNA的纯化。
填料性质:
填料性质:
基质 | 4%的琼脂糖凝胶 |
配体密度 | 3-7 μmol /mL |
吸附载量 | 0.4-0.6 mg人纤维蛋白溶酶原/ mL填料 |
介质颗粒大小 | 45-165μm |
最大流速 | 75 cm/h |
pH范围 | 2-11 |
化学稳定性 | 0.01 M HCl,0.1 M NaOH |
*检测条件: 层析柱 10mm×200mm *柱床高 5cm,25℃ |
操作步骤:
一:装柱
1:让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液,对所有的缓冲液进行脱气处理。
2:检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
3:根据需要量取相应量的凝胶,用去离子水清洗掉 20%乙醇。
4:将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
5:用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
二:样品制备
1:样品应完全溶解,为了避免堵塞层析柱,我们建议通过0.45μm过滤器进行离心和过滤,以去除细胞碎片或其他颗粒物质。
三:平衡色谱柱
1:用5-10个柱体积的结合缓冲液平衡该柱,直到流出液电导和pH不变。常用的结合缓冲液是20-50 mM缓冲液,pH7.5。
四:上样
1:样品用平衡液配制,样品一定要离心或过滤后上样。盐浓度太大的样品需要处理后再上样。
2:一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质和没有结合的蛋白,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
五:洗脱
1:不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。常用的洗脱缓冲液是,结合缓冲液加入2 M NaCl。
2:建议在每使用5次之后,用含有50mM磷酸盐缓冲液,pH7.5,0.2 M的ε-氨基己酸,1M NaCl洗涤填料,清洗纤溶酶原。ε-氨基己酸可以通过脱盐柱除去。
六:再生
1:根据样品的性质,赖氨酸琼脂糖 4B 可以通过用 2-3 床体积的高 pH(0.1M Tris-HCl,0.5M NaCl,pH8.5)缓冲液和低 pH 值(0.1M 乙酸钠,0.5M NaCl,pH4.5)缓冲液交替洗涤填料来再生。该循环应重复 3 次,随后用至少 5 倍柱体积的结合缓冲液重新平衡。
2:纤溶酶原纯化后,培养基应通过用几个床体积的含有 1M NaCl 和 0.2M 的ε-氨基己酸的 50mM 磷酸缓冲液(pH7.5)洗涤来再生。
3:核酸纯化后,用至少 5 床体积的含有 2M NaCl 的 50mM 磷酸缓冲液(pH7.5)清洗填料。
1:让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液,对所有的缓冲液进行脱气处理。
2:检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
3:根据需要量取相应量的凝胶,用去离子水清洗掉 20%乙醇。
4:将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
5:用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
二:样品制备
1:样品应完全溶解,为了避免堵塞层析柱,我们建议通过0.45μm过滤器进行离心和过滤,以去除细胞碎片或其他颗粒物质。
三:平衡色谱柱
1:用5-10个柱体积的结合缓冲液平衡该柱,直到流出液电导和pH不变。常用的结合缓冲液是20-50 mM缓冲液,pH7.5。
四:上样
1:样品用平衡液配制,样品一定要离心或过滤后上样。盐浓度太大的样品需要处理后再上样。
2:一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质和没有结合的蛋白,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
五:洗脱
1:不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。常用的洗脱缓冲液是,结合缓冲液加入2 M NaCl。
2:建议在每使用5次之后,用含有50mM磷酸盐缓冲液,pH7.5,0.2 M的ε-氨基己酸,1M NaCl洗涤填料,清洗纤溶酶原。ε-氨基己酸可以通过脱盐柱除去。
六:再生
1:根据样品的性质,赖氨酸琼脂糖 4B 可以通过用 2-3 床体积的高 pH(0.1M Tris-HCl,0.5M NaCl,pH8.5)缓冲液和低 pH 值(0.1M 乙酸钠,0.5M NaCl,pH4.5)缓冲液交替洗涤填料来再生。该循环应重复 3 次,随后用至少 5 倍柱体积的结合缓冲液重新平衡。
2:纤溶酶原纯化后,培养基应通过用几个床体积的含有 1M NaCl 和 0.2M 的ε-氨基己酸的 50mM 磷酸缓冲液(pH7.5)洗涤来再生。
3:核酸纯化后,用至少 5 床体积的含有 2M NaCl 的 50mM 磷酸缓冲液(pH7.5)清洗填料。
保存条件:
使用完的填料,用纯水彻底冲洗,最后保存在 20%乙醇中,4℃保存。
注意事项:
1:上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。
2:在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
3:不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
2:在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
3:不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
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参考文献 & 客户发表文献
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质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )