包装规格：
5mL 10mL 25mL 100mL in glass bottle
产品简介：
本产品是用于纯化或去除纤连蛋白的一类介质。纤连蛋白是一种大分子糖蛋白，广泛存在于动物组织、组织液和血浆中。本产品采用高交联的4%琼脂糖介质，可耐受较高的流速及化学稳定性，适合大规模纯化。
操作步骤：
一：缓冲液的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
平衡/洗杂液：50mM Tris-HCI,0.15M NaCl,1mM EDTA,pH7.4
洗脱液：50mM sodiumacetate,1.0M NaBr或KBr,pH5.0
洗脱液还可选择：平衡液中加入8M尿素
平衡/洗杂液可选择生理条件下的pH和离子浓度，磷酸盐或Tris-HCI缓冲液都可以。
二：样品准备
上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂液透析。
样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
注：纤连蛋白可以吸附到玻璃上，所用容器等可选择硅化玻璃，减少样品损失。
三：装填
1：重力柱的装填
a：取合适规格的重力层析柱，装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。
b：将明胶-琼脂糖凝胶4FF混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入至重力柱中(介质实际体积占悬液的一半),打开下出口流干保护液。
c：加入适量纯水冲洗介质，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。
d：装入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之前没有空隙，且保持水平。
e：装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡，暂不使用时则加入保护液，2-8℃保存。
2：中压层析柱的装填
本产品被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装，下面介绍填装层析柱的方法。装柱前根据层析柱直径计算柱子底面积，根据所需装柱高度计算所需介质体积，公式如下：
V=1.15πr²h
V:所需介质体积mL
1.15:压缩系数
r:柱管半径cm
h:装填高度cm
注意：所取悬液体积应为介质体积的两倍，因为介质体积只占悬液总体积的一半，另一半为保护液。
a：用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
b：将介质悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
c：如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
d：打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
e：关闭泵，关闭层析柱出口。
f：如果使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
g：将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
h：将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
四：样品纯化
1：孵育法纯化
a：根据纯化的样品量，取适量明胶-琼脂糖凝胶4FF加入离心管中，1000rpm离心1min,吸弃上清；也可加入重力柱中，流干保护液。
b：向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000rpm离心1min,吸弃上清；如使用重力柱，则直接在重力柱中清洗，直接重力流干平衡液；重复两次以上。
c：加入样品，封闭离心管或重力柱管，4℃振荡孵育2-4h或者37℃孵育30min-2h。
d：孵育结束后，1000rpm离心1min,吸弃上清，或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。
e：用5倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000rpm离心1min或重力柱管过滤，去除上清(注意不要吸到介质),重复3-5次，中间建议更换新离心管。
f：加入3-5倍柱体积的洗脱液进行洗脱，室温孵育5min,1000rpm离心1min或重力柱管收集洗脱液，可重复2-3次。
2：重力柱法纯化
a：将装填好的明胶-琼脂糖凝胶4FF重力柱用5倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下，重复2-3次。
b：将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少2min,保证样品和介质充分接触，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。
c：用10-15倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
d：使用5-10倍柱体积的洗脱液洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。
3：中压层析柱法纯化
明胶-琼脂糖凝胶4FF装填好后，可以用各种常规的中低压色谱系统。
a：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
b：用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
c：使用至少5倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。
d：利用泵或样品环上样。注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
e：用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。
f：使用5-10倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
介质洗脱结束后，用平衡液冲洗5-10柱体积，然后用纯水冲洗5-10个柱体积，再用20%乙醇冲洗2个柱体积，置于2-8℃保存。
五：SDS-PAGE检测
将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
六：填料再生和清洗
本产品的再生可以选择使用2-3倍柱体积的0.1M Tris-HCI,0.5M NaCl,pH8.5和0.1M醋酸钠，0.5M NaCL,pH4.5清洗，重复3次，在用3-5倍柱体积的结合液平衡。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用以下方法：
用2-3倍柱体积的0.1%TritonX-100 37℃清洗，然后立即用5倍柱体积的结合液平衡。
所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
平衡/洗杂液：50mM Tris-HCI,0.15M NaCl,1mM EDTA,pH7.4
洗脱液：50mM sodiumacetate,1.0M NaBr或KBr,pH5.0
洗脱液还可选择：平衡液中加入8M尿素
平衡/洗杂液可选择生理条件下的pH和离子浓度，磷酸盐或Tris-HCI缓冲液都可以。
二：样品准备
上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂液透析。
样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
注：纤连蛋白可以吸附到玻璃上，所用容器等可选择硅化玻璃，减少样品损失。
三：装填
1：重力柱的装填
a：取合适规格的重力层析柱，装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。
b：将明胶-琼脂糖凝胶4FF混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入至重力柱中(介质实际体积占悬液的一半),打开下出口流干保护液。
c：加入适量纯水冲洗介质，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。
d：装入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之前没有空隙，且保持水平。
e：装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡，暂不使用时则加入保护液，2-8℃保存。
2：中压层析柱的装填
本产品被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装，下面介绍填装层析柱的方法。装柱前根据层析柱直径计算柱子底面积，根据所需装柱高度计算所需介质体积，公式如下：
V=1.15πr²h
V:所需介质体积mL
1.15:压缩系数
r:柱管半径cm
h:装填高度cm
注意：所取悬液体积应为介质体积的两倍，因为介质体积只占悬液总体积的一半，另一半为保护液。
a：用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
b：将介质悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
c：如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
d：打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
e：关闭泵，关闭层析柱出口。
f：如果使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
g：将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
h：将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
四：样品纯化
1：孵育法纯化
a：根据纯化的样品量，取适量明胶-琼脂糖凝胶4FF加入离心管中，1000rpm离心1min,吸弃上清；也可加入重力柱中，流干保护液。
b：向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000rpm离心1min,吸弃上清；如使用重力柱，则直接在重力柱中清洗，直接重力流干平衡液；重复两次以上。
c：加入样品，封闭离心管或重力柱管，4℃振荡孵育2-4h或者37℃孵育30min-2h。
d：孵育结束后，1000rpm离心1min,吸弃上清，或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。
e：用5倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000rpm离心1min或重力柱管过滤，去除上清(注意不要吸到介质),重复3-5次，中间建议更换新离心管。
f：加入3-5倍柱体积的洗脱液进行洗脱，室温孵育5min,1000rpm离心1min或重力柱管收集洗脱液，可重复2-3次。
2：重力柱法纯化
a：将装填好的明胶-琼脂糖凝胶4FF重力柱用5倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下，重复2-3次。
b：将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少2min,保证样品和介质充分接触，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。
c：用10-15倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
d：使用5-10倍柱体积的洗脱液洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。
3：中压层析柱法纯化
明胶-琼脂糖凝胶4FF装填好后，可以用各种常规的中低压色谱系统。
a：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
b：用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
c：使用至少5倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。
d：利用泵或样品环上样。注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
e：用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。
f：使用5-10倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
介质洗脱结束后，用平衡液冲洗5-10柱体积，然后用纯水冲洗5-10个柱体积，再用20%乙醇冲洗2个柱体积，置于2-8℃保存。
五：SDS-PAGE检测
将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
六：填料再生和清洗
本产品的再生可以选择使用2-3倍柱体积的0.1M Tris-HCI,0.5M NaCl,pH8.5和0.1M醋酸钠，0.5M NaCL,pH4.5清洗，重复3次，在用3-5倍柱体积的结合液平衡。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用以下方法：
用2-3倍柱体积的0.1%TritonX-100 37℃清洗，然后立即用5倍柱体积的结合液平衡。
保存条件：
2-8°C
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
