蛋白质等电点的测定
2020-05-21
[实验目的]
掌握酪蛋白等电点的测定方法。
[实验原理]
蛋白质在酸性或碱性溶液中，分别带有正、负电荷，它们互相排斥，不容易生成沉淀，当溶 液的pH改变而使蛋白质分子所带有的正、负电荷数接近相等时，即失去同电相斥的作用。因此， 蛋白质分子很容易彼此结合而沉淀，此时溶液的pH称为该蛋白质的等电点。
在本实验中用酪蛋白的乙酸钠溶液与不同浓度的乙酸溶液组成5种不同pH缓冲溶液，观察并比较各管中酪蛋白的溶解度，其中沉淀最多的试管的PH即为酪蛋白的等电点。
取试管5支编号，分别按下表准确加入试剂，混匀。
(2) 于各试管中加人酪蛋白的乙酸钠溶液1 mL，边加边摇(切勿在各管加完后才摇)，观察商品 各管的浑浊度。静置10~30 min后，比较各管的浑浊度，用(+ )号表示其浑浊程度。沉淀最多交联葡 而上清液较透明的试管的pH,即为酪蛋白的等电点。
[试剂与器材 ]
1.试剂
(1) 0.01 mol/L乙酸溶液。
(2) 0.1 mol/L乙酸溶液。
(3) 1 molL乙酸溶液。
(4) 0.5%酪蛋白的乙酸钠溶液称取纯酪蛋白0.25g,置于50 mL容量瓶内，准确地加入蒸馏水20mL及1moL/LNaOH溶液5mL,摇匀，使酪蛋白溶解，加1mol/L乙酸溶液5mL，最后用蒸馏水稀释至刻度。
2.器材
①试管振荡器;②试管;③定时钟;④刻度吸管;⑤试管。
掌握酪蛋白等电点的测定方法。
[实验原理]
蛋白质在酸性或碱性溶液中，分别带有正、负电荷，它们互相排斥，不容易生成沉淀，当溶 液的pH改变而使蛋白质分子所带有的正、负电荷数接近相等时，即失去同电相斥的作用。因此， 蛋白质分子很容易彼此结合而沉淀，此时溶液的pH称为该蛋白质的等电点。
在本实验中用酪蛋白的乙酸钠溶液与不同浓度的乙酸溶液组成5种不同pH缓冲溶液，观察并比较各管中酪蛋白的溶解度，其中沉淀最多的试管的PH即为酪蛋白的等电点。
取试管5支编号，分别按下表准确加入试剂，混匀。
| 试剂(mL) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 蒸馏水 | 8.4 | 8.7 | 8.0 | 8.2 | 7.4 |
| 0.01mol/L乙酸溶液 | 0.6 | - | - | - | - |
| 0.1mol/L乙酸溶液 | - | 0.3 | 1.0 | - | - |
| 1.0mol/L乙酸溶液 | - | - | - | 0.5 | 1.6 |
| 加酪蛋白乙酸钠溶液后pH | 5.9 | 5.3 | 4.7 | 4.0 | 3.5 |
(2) 于各试管中加人酪蛋白的乙酸钠溶液1 mL，边加边摇(切勿在各管加完后才摇)，观察商品 各管的浑浊度。静置10~30 min后，比较各管的浑浊度，用(+ )号表示其浑浊程度。沉淀最多交联葡 而上清液较透明的试管的pH,即为酪蛋白的等电点。
[试剂与器材 ]
1.试剂
(1) 0.01 mol/L乙酸溶液。
(2) 0.1 mol/L乙酸溶液。
(3) 1 molL乙酸溶液。
(4) 0.5%酪蛋白的乙酸钠溶液称取纯酪蛋白0.25g,置于50 mL容量瓶内，准确地加入蒸馏水20mL及1moL/LNaOH溶液5mL,摇匀，使酪蛋白溶解，加1mol/L乙酸溶液5mL，最后用蒸馏水稀释至刻度。
2.器材
①试管振荡器;②试管;③定时钟;④刻度吸管;⑤试管。
