| 中文名称: | 异硫氰酸荧光素 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Fluorescein isothiocyanate isomer I | ||||
| 别名: | 3' ,6'-二羟基-5-异硫氰酸酯基-3H-螺[异苯并呋喃-1,9'-氧杂蒽]-3-酮 FITC | ||||
| CAS No: | 3326-32-7 | 分子式: | C21H11NO5S | 分子量: | 389.38 |
| CAS No: | 3326-32-7 | ||||
| 分子式: | C21H11NO5S | ||||
| 分子量: | 389.38 | ||||
| MDL: | MFCD00005063 | EINEC: | 248-207-7 | ||
| EINEC: | 248-207-7 | ||||
熔点：
>360°C
外观与性状：
黄白色粉末
包装规格：
100mg 500mg 1g in glass bottle
产品简介：
异硫氰酸荧光素(FITC)具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点，是生物学中应用最为广泛的一种绿色荧光素衍生物，其异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，标记抗体用以快速鉴定病原体，以及用于蛋白质和多肽(HPLC)的微量测序。FITC为黄橙色粉末，最大激发波长为494 nm。一旦激发，在最大发射波长520 nm处呈黄-绿色荧光。
标记反应所需的FITC用量取决于要标记蛋白的用量，FITC与蛋白的最佳质量比为1：50 左右。
标记反应所需的FITC用量取决于要标记蛋白的用量，FITC与蛋白的最佳质量比为1：50 左右。
溶解性：
溶于乙醇（20MG/ML）、丙酮（1MG/ML）、二甲基亚砜（5mg/ml）、甲醇和DMF。
储备液保存：
-80°C, 6 months
-20°C, 1 month
(protect from light, stored under nitrogen)
-20°C, 1 month
(protect from light, stored under nitrogen)
体内实验：
1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→40% PEG300→5% Tween-80→45% Saline
Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (5.34 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: 2.08 mg/mL (5.34 mM); 悬浊液; 超声助溶
此方案可获得 2.08 mg/mL的均匀悬浊液，悬浊液可用于口服和腹腔注射。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。
＜1mg/ml表示微溶或不溶。
普西唐提供的所有化合物浓度为内部测试所得，实际溶液度可能与公布值有所偏差，属于正常的批间细微差异现象。
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (5.34 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: 2.08 mg/mL (5.34 mM); 悬浊液; 超声助溶
此方案可获得 2.08 mg/mL的均匀悬浊液，悬浊液可用于口服和腹腔注射。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。
＜1mg/ml表示微溶或不溶。
普西唐提供的所有化合物浓度为内部测试所得，实际溶液度可能与公布值有所偏差，属于正常的批间细微差异现象。
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
操作步骤：
原液制备
1. 蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 1 mg/mL。
1) 蛋白溶液PH值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 1 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 1-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
1) 将无水二甲基亚砜加入 FITC 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液，震荡摇匀。
注：FITC 要现配现用，避光。
3. 染料用量计算
1)标记反应所需的 FITC 用量取决于要标记蛋白的用量，FITC 与蛋白的最佳质量比为 1：50 左右。
2)例：假如所需标记蛋白为 1 mL，2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC，则所需 FITC 体积为 40 μL。
计算公式：
Molar F/P=(MW/389)*(A495/195)/{[A280-(0.35*A495)]/E0.1%}=(A495*C)/[A280-(0.35*A495)]
C=(MW*E0.1%280)/(389*195)
注：
C：一种蛋白质常数； MW：蛋白质分子量； 389：FITC 的分子量； 195：FITC 偶联物在 pH=13, 490 nm 处的吸光值 E0.1%； （0.35×A495）：基于 FITC A280 的校正因子； E0.1%：蛋白（1.0 mg/mL）在 280 nm 处的吸光值。
1. 蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 1 mg/mL。
1) 蛋白溶液PH值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 1 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 1-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
1) 将无水二甲基亚砜加入 FITC 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液，震荡摇匀。
注：FITC 要现配现用，避光。
3. 染料用量计算
1)标记反应所需的 FITC 用量取决于要标记蛋白的用量，FITC 与蛋白的最佳质量比为 1：50 左右。
2)例：假如所需标记蛋白为 1 mL，2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC，则所需 FITC 体积为 40 μL。
计算公式：
Molar F/P=(MW/389)*(A495/195)/{[A280-(0.35*A495)]/E0.1%}=(A495*C)/[A280-(0.35*A495)]
C=(MW*E0.1%280)/(389*195)
注：
C：一种蛋白质常数； MW：蛋白质分子量； 389：FITC 的分子量； 195：FITC 偶联物在 pH=13, 490 nm 处的吸光值 E0.1%； （0.35×A495）：基于 FITC A280 的校正因子； E0.1%：蛋白（1.0 mg/mL）在 280 nm 处的吸光值。
保存条件：
2-8℃ 干燥
使用说明：
一：标记反应
1：取算好体积的新鲜配制的50 μL FITC 缓慢加入到1 mL蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2：将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育8 h，每隔30分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
3：加入 5 M 的 NH4Cl 至终浓度 50 mM，4℃ 终止反应 2 h。
二：蛋白纯化脱盐（Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例)
1：按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2：将反应混合物装入Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3：当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4：向所需样品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合物含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。
1：取算好体积的新鲜配制的50 μL FITC 缓慢加入到1 mL蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2：将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育8 h，每隔30分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
3：加入 5 M 的 NH4Cl 至终浓度 50 mM，4℃ 终止反应 2 h。
二：蛋白纯化脱盐（Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例)
1：按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2：将反应混合物装入Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3：当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4：向所需样品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合物含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。
注意事项：
1：FITC对光及湿度敏感，需现配现用。
2：避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。
3：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
4：为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
5：以上信息仅做参考交流之用。
2：避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。
3：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
4：为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
5：以上信息仅做参考交流之用。
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危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
